利用siRNA抑制NF-κB p65蛋白表达对EOMA细胞中TF表达影响

摘要

目的 探讨针对小鼠EOMA细胞核因子κB(NF-κB)的小干扰RNA(siRNA)对细胞中组织因子(TF)表达的抑制作用。方法 设计并化学合成针对小鼠NF-κB p65的siRNA,按照实验分组分别转染小鼠EOMA细胞,转染24 h后,在相应细胞中加入肿瘤坏死因子α(TNF-α,终浓度为20 mg/L),于此后6h分别提取各组细胞总蛋白及RNA,检测细胞内NF-κB p65蛋白表达和TF的mRNA水平。结果 TNF-α刺激6h后,与空白对照组相比,阴性对照组、scramble siRNA组细胞内NF-κB p65蛋白表达和TF mRNA水平增加,而siRNA组则明显受到抑制;TNF组、TNF+scramble siRNA组细胞内NF-κB p65蛋白表达和TF mRNA水平明显增加,TNF+siRNA组细胞内NF-κB p65蛋白表达和TF mRNA水平较空白对照组有所增加,但明显低于TNF组、TNF+scramble siRNA组(P <0.01)。结论 利用siRNA抑制NF-κB p65蛋白表达可以有效地抑制NF-κB下游靶基因TF的表达。

关键词

小干扰RNA / 血管内皮细胞 / 核因子κB / 组织因子 / 延迟性排斥反应