特异性siRNA的筛选及CTGF-shRNA质粒的构建

摘要

目的 构建结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)短发夹RNA (short hairpin RNA,shRNA)重组质粒,研究其在人皮肤瘢痕成纤维细胞中对CTGF基因表达的沉默效果,为探讨病理性瘢痕的基因治疗奠定基础。方法 设计针对人CTGF基因特异性的3条siRNA oligo,通RT-PCR及Western blot检测其在瘢痕成纤维细胞中的干扰效果,从中筛选出一条最佳片段。根据所筛选出的最佳片段序列设计并构建CTGF-shRNA质粒,通过单酶切和测序鉴定该质粒。结果 3条siRNA oligo中C3序列干扰效果最佳。酶切鉴定和测序分析证实重组质粒构建成功。结论 成功构建CTGF-shRNA质粒,为进一步探索CTGF对人皮肤病理性瘢痕形成的作用奠定了基础。

关键词

结缔组织生长因子 / 成纤维细胞 / RNA干扰 / 短发夹RNA / 质粒