人缺失型Midkine重组蛋白的原核表达及活性鉴定

摘要

目的 构建人缺失型Midkine(tMK)的原核表达载体,以得到具有生物学活性的重组蛋白。方法 从测序正确的pMD18-T-tmk Vector重组质粒上切下tmk序列,重组至pET30(a+)载体中,转化BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达,Heparin Sepharose 4B纯化蛋白,CCK-8检测其促NIH3T3和BGC823细胞增殖的活性。结果 成功构建了tMK的原核表达载体,纯化得到重组tMK蛋白。该蛋白在0.031 25～0.5 mg/L范围时能明显促进NIH3T3细胞增殖(P<0.05或P<0.01),在0.062 5～2 mg/L范围时能明显促进BGC823细胞增殖(P<0.05)。结论 获得了具有生物学活性的重组tMK蛋白。

关键词

缺失型Midkine / 载体构建 / 蛋白纯化 / 细胞增殖