抗华支睾吸虫成虫抗原McAb制备及功能鉴定的研究

摘要

目的 利用杂交瘤技术建立分泌抗华支睾吸虫成虫抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株并对其分泌抗体的免疫学活性进行初步鉴定。方法 以华支睾吸虫成虫抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞进行融合,筛选分泌高滴度单克隆抗体的杂交瘤细胞株,采用动物体内诱生的方法制备单克隆抗体并对其纯化,测定所制备单抗效价和其免疫球蛋白亚类,检测单抗与猪囊尾蚴、弓形虫、疟原虫和日本血吸虫抗原的交叉反应,观测单抗对虫体的识别部位和其与感染小鼠肝脏组织中抗原的结合情况。结果 获得1株分泌高滴度抗华支睾吸虫成虫抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分泌的单抗命名为D10。其效价达1:200 000以上,纯度达90%以上,亚类鉴定为IgG1类;单抗株D10与猪囊尾蚴、弓形虫、疟原虫和日本血吸虫抗原无交叉反应;免疫荧光法见其与华支睾吸虫成虫表皮及虫卵结合;免疫组化显示单抗株D10与病变肝脏组织中汇管区及周围间质中的抗原结合明显。结论 制备的单抗株D10具有高效价和高特异性,为华支睾吸虫病的研究及华支睾吸虫病诊断抗体的研制奠定了基础。

关键词

华支睾吸虫 / 单克隆抗体 / ELISA

基金资助

国家自然科学基金(819971590); 卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室,江苏省寄生虫病预防与控制高技术平台开放研究课题(10K008-003)