荷载管家基因shRNA的双调控溶瘤腺病毒抑制肾癌细胞增殖的研究

摘要

目的 研究荷载管家基因GAPDH shRNA的溶瘤腺病毒(TD-GAPDH)对人肾癌细胞OSRC增殖抑制的作用。方法 病毒TD-GAPDH、TD55、ZD55-EGFP感染OSRC细胞、人肾小管上皮细胞HK-2。Western blot法检测E1A表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot法分别检测GAPDH的mRNA、蛋白的表达;原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡;MTT法检测细胞增殖;结晶紫染色法检测细胞毒作用。结果TDGAPDH、TD55、ZD55-EGFP感染的OSRC细胞均表达E1A,HK-2细胞均不表达;抑制OSRC细胞GAPDH表达作用依次为TD-GAPDH> TD55> ZD55-EGFP。TD-GAPDH、TD55、ZD55-EGFP感染OSRC细胞的凋亡率(%)依次为(48.0±3.17)、(32.3±6.68)、(23.6±5.43),各组之间差异均有统计学意义(P<0.05);用10MOI TD-GAPDH、TD55、ZD55-EGFP感染OSRC细胞,4天后存活率(%)依次为:(26.1±2.98)、(47.2±3.10)、(61.2±2.52)、PBS(100),各组间比较差异均有统计学意义(P <0.05);病毒对OSRC细胞的毒性作用依次为TD-GAPDH>TD55>ZD55-EGFP。结论 TD-GAPDH能在肾癌OSRC细胞复制,具有显著的抑制肾癌OSRC细胞GAPDH基因表达、诱导凋亡、杀伤肾癌细胞作用。为溶瘤腺病毒进一步荷载癌基因的shRNA奠定基础。

关键词

肾癌 / 溶瘤腺病毒 / GAPDH基因 / 短发夹RNA