心肌微环境中Wnt11与BMP2协同作用促大鼠BM-MSCs分化为心肌样细胞的实验研究

摘要

目的 探讨在心肌微环境的旁分泌作用中,Wnt11与BMP2对促进大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow-mesenchymal stem cells,BM-MSCs)分化为心肌样细胞的协同作用。方法 建立Transwell共培养模型,将心肌细胞及转染Wnt11质粒的3T3细胞置于上层、BM-MSCs置于下层培养,前3天应用含50μg/L Noggin(BMP抑制剂)培养液、第4天换用含0.5μg/L BMP2的培养基诱导培养至第14天。根据不同诱导条件,培养细胞分为7组:阳性对照组(Heart组)、CM组、CM+BMP2组、CM+Wnt11组、Wnt11+BMP2组、CM+Wnt11+BMP2组、阴性对照组(BM-MSCs组)。诱导培养结束后,采用RT-PCR方法,检测心肌特异性转录因子(Nkx2.5、GATA4、Mef2c)和成熟心肌细胞特异性基因(cTnI、ANP、α-MHC、β-MHC)mRNA表达水平。结果RT-PCR结果显示,在心肌细胞旁分泌微环境下,Wnt11与BMP2协同作用组(CM+Wnt11+BMP2组)心肌特异性转录因子和成熟心肌细胞特异性基因的表达明显高于阴性对照组和其他共培养对照组,低于阳性对照组(P <0.05)。结论 在心肌细胞旁分泌微环境中,Wnt11协同BMP2表达可提高BM-MSCs向心肌样细胞分化的效率。

关键词

BM-MSCs / Wnt11 / BMP2 / 心肌微环境 / 诱导分化 / 心肌样细胞