Tet-on调控的基因表达载体的构建与体外表达研究

摘要

目的 依据Tet-on系统的原理,构建2个真核表达载体pTRE-Cre-EGFP(P1)和Pcmv-rtTA-EGFP-Cre-Phcmv(P2)并转染293T细胞,通过观察报告基因EGFP表达的绿色荧光,检验载体中基因元件能否正常发挥作用。方法 从pCre-IRES-EGFP载体上切下Cre-EGFP,与pTRE载体连接成P1载体,切下P1的部分片段Phcmv-Cre-EGFP与pTet-On载体的部分片段Pcmv-rtTA连接成P2载体,利用脂质体将pTet-on和P1共转染、将P2单转染入293T细胞,加入或者不加强力霉素(Doxcycline,Dox)诱导,观察绿色荧光。结果 成功构建载体P1及P2;Pl和pTet-on质粒的共转染及P2的单转染在Dox诱导下均有绿色荧光的表达,无Dox诱导时绿色荧光表达水平极低。结论 构建的载体P1及P2中的基因元件在体外均能正常发挥作用,为进一步制备诱导性表达Cre的转基因小鼠奠定了基础。

关键词

真核表达载体 / Tet-on / 转染