pTRUF11-GFP-Bip载体的构建及真核表达鉴定

摘要

目的 构建Bip蛋白真核表达重组体用于缺血性脑损伤机制的研究。方法 用RT-PCR方法获得Bip的cDNA;与TOPO载体连结,连接产物转化大肠杆菌DH5α进行筛选、序列测定;Bip cDNA片段亚克隆到真核表达载体pTRUF11-GFP;重组体pTRUF1 1-GFP-Bip转到293H细胞,Western blot鉴定Bip的表达。结果 (1)经RT-PCR法得到了Bip的双链cDNA;(2)Bip测序图谱与GeneBank报道完全一致;(3)酶切鉴定能观察到Bip和pTRUF11-GFP两条带;(4)Western blot检测pTRUF11-GFP-Bip能表达Bip蛋白。结论 获得了能真核表达Bip蛋白的重组体。

关键词

结合免疫球蛋白 / pTRUF11-GFP载体 / 真核表达