Rap2c基因真核表达质粒的构建与表达

摘要

目的 为了探讨Rap2c基因与肺癌发生的关系,克隆人Ras家族小G蛋白Rap2c的cDNA,构建其真核表达质粒并在人肺癌细胞株A549和H1299中表达。方法 人骨肉瘤细胞株U20S提取细胞总RNA,经逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)逆转录成cDNA,PCR扩增Rap2c,酶切后插入pcDNA3.1(+)构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-Rap2c,采用酶切及测序鉴定。重组质粒转染A549和H1299细胞,Western blot检测其目的基因表达。结果 双酶切及测序结果显示重组质粒pcDNA3.1(+)-Rap2c成功构建,Werstern blot检测到A549和H1299细胞有相应蛋白表达。结论 成功构建人Rap2c基因真核表达质粒,为后续研究奠定了基础。

关键词

Rap2c / 基因克隆 / 真核表达