大鼠PEDF 44mer慢病毒载体的构建及鉴定

摘要

目的 构建大鼠色素上皮衍生因子(PEDF)44mer基因的慢病毒表达载体并检测其表达。方法 化学合成PEDF 44mer-6his,亚克隆入GV206载体,测序鉴定。挑取阳性克隆转染293T细胞,实时荧光定量PCR法测定病毒滴度。将已构建的病毒转染293T细胞,RT-PCR和Westernblot法检测44mer-6his表达。结果 阳性克隆测序与设计的44mer基因序列完全一致,44mer慢病毒构建成功。实时荧光定量PCR法检测病毒滴度为2.00E+9 TU/ml。44mer慢病毒转染293T细胞后,RT-PCR检测到44mer表达。Western blot显示44mer-6his融合蛋白表达阳性。结论 成功设计构建了PEDF 44mer慢病毒,为进一步研究44mer在缺血性心肌病中的作用和机制奠定基础。

关键词

色素上皮衍生因子 / 44mer基因 / 6his / 慢病毒表达载体