牙龈卟啉单胞菌FtsZ降解试验模型-clpP基因缺失株的构建

摘要

目的 建立牙龈卟啉单胞菌分裂关键蛋白FtsZ (FtsZ^Pg)体内降解试验模型,即构建蛋白酶编码基因clpP缺失的E.coli MG1655。方法 将一段两端含靶基因同源臂的PCR产物电转入L-阿拉伯糖诱导后表达λ噬菌体重组蛋白、具有较强重组能力、含质粒pKD46的菌株E.coli MG1655感受态细胞,以PCR产物中的氯霉素抗性基因替代靶基因。结果 利用氯霉素抗性平板筛选阳性重组体,得到E.coli MG1655的ClpP蛋白酶基因敲除突变株。通过琼脂糖凝胶电泳和DNA测序最终鉴定阳性clpP基因缺失株。结论 本试验成功构建了E. coli MG1655 clpP敲除株;该敲除株有望在探讨重要牙周致病菌牙龈卟啉单胞菌分裂关键蛋白FtsZ^Pg与蛋白酶clpP的关系中发挥一定作用。

关键词

敲除 / ClpP蛋白酶 / 牙龈卟啉单胞菌 / 大肠埃希菌