表达抗G250人源性抗体增殖缺陷型腺病毒的构建

摘要

目的 构建表达抗G250人源性抗体的增殖缺陷型腺病毒。方法 通过重叠延伸PCR、常规PCR方法,分别获得G250重链的可变区和恒定区(GH)cDNA序列及G250轻链(GL) cDNA序列,并克隆至pCLON12-IRES载体上,构建质粒pCLON12-GL-IRES-GH。酶切质粒pCLON12-GL-IRES-GH回收GL-IRES-GH片段,克隆至腺病毒载体pDC315,构建pDC315-GL-IRES-GH(pDC315-G250)。将pDC315-G250与腺病毒包装骨架质粒pBHGE3共转染HEK293细胞,重组包装表达G250抗体的增殖缺陷型腺病毒AdDC315-G250。纯化病毒表达的G250抗体,免疫印迹实验检测该抗体能否与细胞表面抗原特异性结合。结果 PCR及测序结果表明成功构建质粒pCLON12-GL-IRES-GH及腺病毒穿梭质粒pDC315-G250。PCR鉴定表明重组腺病毒AdDC315-G250含有目的基因,病毒包装成功。免疫印迹实验结果显示,纯化的抗体在G250抗原阳性的细胞中能检测到目的条带。结论 成功构建表达抗G250人源性抗体的增殖缺陷型腺病毒。

关键词

肾肿瘤 / G250 / 抗体 / 增殖缺陷型腺病毒 / 重组腺病毒