骨桥蛋白启动子区报告基因的构建

摘要

目的 克隆和构建带人骨桥蛋白(OPN)启动子区基因的载体pGL3-OPN。方法 一步法提取人脐静脉内皮细胞(HUVEC)总DNA,PCR扩增OPN全长基因,克隆入T载体,测序,双酶切连入真核表达载体pGL3-vector,酶切鉴定。将构建好的pGL3-OPN瞬时转染到人乳腺癌细胞MDA-MB-435中,利用双荧光素酶报告基因检测试剂盒进行检测,通过计算两种质粒荧光素酶活性的比值来筛选药物。结果 扩增出人OPN基因全长,测序结果和GenBank记载一致,成功克隆入真核表达载体。p47可一定程度激活OPN启动子活性。结论 成功构建带有人OPN基因的真核表达载体pGL3-OPN。

关键词

骨桥蛋白 / 真核表达载体pGL3 / 肿瘤转移