大鼠Somatostatin基因重组慢病毒载体的构建与检测

摘要

目的 克隆大鼠生长抑素somatostatin(SST)基因和神经元突触素Synapsin(Syn1)的启动子序列，构建神经元特异性表达SST基因的重组慢病毒载体。方法 采用RT-PCR法和PCR法分别扩增SST基因和Syn1的启动子序列，并将其克隆至重组慢病毒载体系统(Lenti-EGFP),构建出以Syn1启动子序列为启动子、携带SST基因的表达质粒Lenti-pSyn-SST-2A-EGFP;再将该表达质粒与pMDL、pRev和pVSVG用磷酸钙共沉淀法共转染HEK293T细胞，获得重组的慢病毒载体，将病毒注射入大鼠海马，检测EGFP和SST的表达效果。结果 经测序克隆的SST和Syn1启动子与GenBank上的序列相比完全一致，并测得SST重组慢病毒纯化后病毒滴度为1.5×10～9 TU/ml,该病毒注射入海马可以转染神经元并表达SST。结论 成功构建出以Syn1启动子序列为启动子，携带SST基因的重组慢病毒载体。

关键词

生长抑素 / 神经元突触素启动子 / 慢病毒载体 / 构建