小鼠受体酪氨酸激酶EphB2 FN结构域在大肠杆菌中的表达与纯化

摘要

目的 将小鼠受体酪氨酸激酶EphB2 FN结构域在大肠杆菌细胞中进行表达与纯化，以便于研究与FN结构域相互作用的蛋白质。方法 以重组质粒GV287-EphB2作为模板，经PCR扩增，得到FN结构域的cDNA片段，并将其克隆至pET-28a载体中。将重组质粒pET-28a-FN转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，经IPTG诱导后，利用SDS-PAGE检测FN-His₆融合蛋白的表达。最后采用Ni-NTA亲和层析法对该蛋白进行纯化。结果 本研究成功地构建了FN结构域的原核表达载体。经鉴定，FN-His₆融合蛋白能够在大肠杆菌中表达。纯化后，得到少量可溶性FN-His₆融合蛋白。结论 小鼠受体酪氨酸激酶EphB2 FN结构域可以在大肠杆菌中表达并纯化，为研究与FN结构域相互作用的蛋白奠定了实验基础。

关键词

EphB2 / FN结构域 / 原核表达 / 亲和层析

基金资助

国家自然科学基金(81300930,81273489); 江苏省自然科学基金(BK20130232,BK2012582); 江苏省高校自然科学研究重大项目(12KJA180008)