成年比格犬骨髓间充质干细胞体外定向成骨诱导实验研究

摘要

目的 通过将成年比格犬骨髓间充质干细胞(BMSCs)建立体外培养体系，观察及掌握细胞生长形态，运用诱导剂体外定向诱导分化为成骨细胞，为后期建立骨组织工程提供种子细胞。方法 提取成年比格犬的BMSCs,运用半骨髓直接贴壁法进行体外分离与培养。将第2代BMSCs分成2组，实验组用加入等量诱导剂1(地塞米松、β-磷酸甘油钠、L-抗坏血酸)和诱导剂2(骨形态发生蛋白-2即BMP-2)的含胎牛血清培养液进行联合定向成骨诱导培养，对照组只用含血清的培养液进行培养，并于诱导的3、7、14、21天分别行碱性磷酸酶(ALP)活性检测，并于3周后进一步行茜素红染色、ALP染色，4周后行Von-Kossa染色来鉴定诱导分化的成骨细胞。结果 诱导3、7、14、21天，实验组细胞的ALP活性呈先增强后减弱的状态，对照组无明显变化。实验组细胞诱导3周后行茜素红染色、ALP染色及诱导4周后行Von-Kossa染色都呈阳性，对照组均为阴性。以上结果均符合成骨细胞的特性，说明实验组有大量成骨细胞生成。结论 体外分离培养的成年比格犬BMSCs在一定诱导剂的作用下可以向成骨细胞定向分化。

关键词

成骨细胞 / 定向诱导 / 比格犬 / 骨组织工程