特异性的shRNA抑制c-Jun蛋白表达对HepG2细胞增殖和迁移的影响

摘要

目的 构建c-Jun特异性的shRNA及研究其抑制c-Jun蛋白表达对人类肝癌细胞HepG2增殖和迁移的影响。方法 根据c-Jun编码序列设计并构建shRNA质粒，利用Lipofectamine^TM 2000转染HepG2细胞，荧光显微镜观察转染效率。Western blot检测其对c-Jun蛋白表达的影响。CCK-8增殖实验、平板克隆形成实验观察HepG2细胞的增殖情况，transwell和划痕愈合实验方法观察细胞的迁移情况。结果 构建了c-Jun小干扰质粒shRNA-1和shRNA-2。荧光显微镜观察到shRNA质粒在HepG2细胞转染效率约在80%。Western blot显示shRNA-2小干扰质粒对c-Jun抑制效果要强于shRNA-1小干扰质粒。功能实验结果显示，与阴性对照组相比，shRNA-2能显著抑制HepG2细胞的增殖、克隆形成及其迁移能力（P均<0.05）。结论 成功构建了对c-Jun有效shRNA干扰质粒，下调c-Jun的表达能够明显抑制肝癌细胞的增殖和迁移，为进一步研究c-Jun在肝癌中的作用及相关机制提供了工作基础。

关键词

c-Jun / RNA小干扰 / HepG2细胞 / 增殖 / 迁移

基金资助

江苏省脑病生物信息重点实验室开放研究课题(Jsb11401); 江苏高校优势学科建设工程(2014); 徐州医学院科研课题(2012KJ05); 徐州市科技局研究课题(XZZD1330)