Kif18A的SUMO化修饰及其调控机制

摘要

目的 探讨Kif18A的SUMO化修饰及其调控机制。方法 在HEK293T细胞中共转染Flag-Kif18A、HA-SUMO1或His-SUMO1质粒，免疫沉淀富集Flag-Kif18A,免疫印迹检测HA-SUMO;用TALON树脂富集His-SUMO1蛋白，免疫印迹检测Flag-Kif18A考察Kif18A的SUMO化水平。利用SUMOsp 2.0软件预测Kif18A可能发生SUMO化的潜在位点，将Flag-Kif18A质粒中的相应位点上的编码序列由Lys突变成Arg,在HEK293T细胞中表达突变体后再检测Kif18A的SUMO化水平的变化来确定Kif18A的SUMO化位点。通过在HEK293T细胞中共染转Flag-Kif18A、HA-SUMO1以及SENP1野生型（WT）或SENP1酶活位点突变型（Mut）质粒，再采用免疫沉淀和免疫印迹检测Kif18A的SUMO化水平，来证明SENP1是Kif18A的去SUMO化蛋白酶。最后，用Nocodazole处理HeLa细胞，使其同步化在G₂/M阶段，再考察G₂/M期HeLa细胞中Kif18A的SUMO化水平。结果 Kif18A能被SUMO1或者SUMO2修饰，K47和K148是Kif18A发生SUMO化的两个主要位点，SENP1催化Kif18A的去SUMO化修饰。HeLa细胞同步化在G₂/M期后，Kif18A的SUMO化水平显著下降。结论 Kif18A能发生SUMO化修饰，且其SUMO化受到细胞有丝分裂进程的调控。

关键词

Kif18A / SUMO化修饰 / 细胞周期