siRNA抑制HMGB1表达对AngⅡ诱导的CFs增殖及胶原分泌的影响

摘要

目的 探讨siRNA干扰高迁移率族蛋白B1（HMGB1）表达能否有效抑制AngⅡ诱导的心成纤维细胞（CFs）的增殖及胶原分泌，从而为心肌纤维化的发生提供新的认识，为心肌纤维化的治疗提供新的思路。方法 酶消化法分离小鼠心脏成纤维细胞，差速贴壁法去除心肌细胞。波形蛋白和DDR2免疫细胞化学染色鉴定成纤维细胞，将CFs分为：A组（正常对照组）:培养时不加干预药物；B组（AngⅡ组）:加AngⅡ10^-6mol/L;C组（AngⅡ+HMGB1siRNA组）:HMGB1siRNA转染CFs后加AngⅡ10^-6mol/L;D组（AngⅡ+阴性对照siRNA组）:阴性对照siRNA转染CFs后加AngⅡ10^-6mol/L。各组细胞培养48 h后，采用CCK8比色法检测CFs细胞增殖，ELISA法检测上清液胶原含量，RT-PCR法测定细胞HMGB1mRNA表达。结果 使用酶消化法和差速贴壁法获得的高纯度细胞符合成纤维细胞的形态特征并且波形蛋白与DDR2免疫细胞化学染色阳性；与A组比较，B组CFs增殖，上清液胶原含量均明显增加（P<0.05）;HMGB1mRNA表达明显上调（P<0.05）,与B组比较，C组CFs增殖，上清液胶原含量显著降低（P<0.05）,HMGB1 mRNA表达显著下调（P<0.05）。B组与D组差异无统计学意义（P>0.05）。结论 HMGB1参与了AngⅡ诱导的CFs增殖及胶原表达过程，siRNA干扰HMGB1表达可有效抑制AngⅡ诱导的CFs的增殖及胶原分泌。

关键词

高迁移率族蛋白B1 / 血管紧张素Ⅱ / 心脏成纤维细胞 / 增殖