PSA启动子调控并荷载hTERT-siRNAs的条件增殖型腺病毒的构建及生物学活性

摘要

目的 构建前列腺特异抗原(PSA)启动子调控并荷载hTERT-siRNAs的条件增殖型腺病毒，研究其对前列腺癌的特异性抗肿瘤作用。方法 EcoRⅤ和XbaⅠ分别酶切pZD55-hTERT-shRNA和pZXC2-PSA-E1A,将目的片段连接重组，获得质粒pPSA-ZD55-hTERT,将其与质粒pBHGE3共转染293细胞。PCR鉴定正确者即为条件增殖型腺病毒PSA-ZD55-hTERT。结晶紫染色观察其对前列腺癌细胞毒性。RT-PCR、Western blot检测前列腺癌细胞中hTERT基因沉默效果。Western blot检测E1A在前列腺癌细胞中的表达。结果 成功构建PSA启动子调控并荷载hTERT-siRNAs的条件增殖型腺病毒PSA-ZD55-hTERT,初步证实PSA-ZD55-hTERT复制具有前列腺癌靶向性和特异的hTERT沉默效果。结论 成功构建条件增殖型腺病毒PSA-ZD55-hTERT,为进一步体内外研究其对前列腺癌的治疗作用奠定基础。

关键词

前列腺癌 / 前列腺特异抗原启动子 / hTERT基因 / RNA干扰 / 腺病毒