瑞马唑仑联合七氟醚通过调控HIF-1α/BNIP3通路介导的线粒体自噬抑制结直肠癌细胞恶性生物学行为的作用研究

摘要

目的 探讨瑞马唑仑联合七氟醚对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响及其机制。方法 体外培养人结直肠癌细胞系HCT116。将细胞分为对照组、七氟醚(Sev)组、瑞马唑仑(Rem)组、联合用药组、Midivi-1(线粒体自噬抑制剂)组、联合用药+Midivi-1组、联合用药+oe-HIF-1α(缺氧诱导因子-1α)组和联合用药+si-HIF-1α组。采用MTT法、划痕实验和侵袭实验测定细胞增殖、迁移和侵袭能力；流式细胞术检测细胞凋亡；JC-1染色检测线粒体膜电位；MitoSOX Red染色检测线粒体活性氧(ROS)生成；透射电子显微镜检测线粒体自噬小体形成；免疫荧光法检测Mito-Tracker/微管相关蛋白1轻链3(LC3)共定位；Western blot检测细胞中线粒体自噬和HIF-1α/Bcl2/腺病毒E1B相关作用蛋白3(BNIP3)通路相关蛋白的表达。结果 与对照组相比，Sev组、Rem组和联合用药组的细胞存活率、划痕愈合率和侵袭率显著降低，凋亡率、Bax和cleaved caspase-3蛋白表达显著升高，Bcl-2蛋白表达和JC-1多聚体/单体比值降低，线粒体ROS含量和Mito-Tracker/LC3共定位荧光强度增加，线粒体自噬小体生成增加，p62蛋白表达降低，LC3Ⅱ/Ⅰ、PTEN诱导假定激酶1(PINK1)、帕金蛋白(Parkin)、HIF-1α和BNIP3蛋白表达升高，且联合用药组效果最为显著，差异有统计学意义(P<0.05)。与联合用药组相比，联合用药+Midivi-1组细胞中Mito-Tracker/LC3共定位荧光强度减弱，细胞存活率、划痕愈合率和侵袭率增加，细胞凋亡率降低；联合用药+oe-HIF-1α组细胞中HIF-1α和BNIP3蛋白表达升高，Mito-Tracker/LC3共定位荧光强度增加；联合用药+si-HIF-1α组细胞HIF-1α和BNIP3蛋白表达降低，Mito-Tracker/LC3共定位荧光强度减少，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 瑞马唑仑联合七氟醚可能通过激活HIF-1α/BNIP3通路介导的线粒体自噬，抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭，并促进其凋亡。

关键词

瑞马唑仑 / 七氟醚 / 结直肠癌 / 线粒体自噬 / HIF-1α/BNIP3通路