巨噬细胞XBP1调控肝脏衰老的机制研究

摘要

目的 探究巨噬细胞X盒结合蛋白1（XBP1）对肝脏衰老的影响及作用机制。方法 选取2月龄（年轻组）和20月龄（老年组）SPF级C57BL/6J雄性小鼠各10只，另选取20月龄的Xbp1髓系特异性敲除小鼠(Xbp1^ΔMφ组)和同窝对照小鼠(Xbp1^FL/FL组)各10只，留取各组小鼠肝脏组织标本。采用β-半乳糖苷酶染色检测肝脏组织衰老相关-β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）的表达；免疫组化检测肝脏组织p16表达；实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测衰老相关分泌表型（SASP,Il1b、Il6、Il8、Cxcl10、Ifnb1）及Xbp1、Nlrp3、Yap1的mRNA表达水平。通过Western blot检测XBP1剪接体（XBP1s）、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）、Yes相关蛋白（YAP）及磷酸化YAP（p-YAP）的蛋白表达水平。通过转录组测序分析20月龄Xbp1^FL/FL和Xbp1^ΔMφ小鼠肝脏基因表达差异。提取各组小鼠肝脏巨噬细胞后，通过RT-qPCR和Western blot分别检测Nlrp3 mRNA及XBP1s、NLRP3蛋白水平。结果 相较于年轻组，老年组小鼠肝脏SA-β-gal、p16表达水平升高，SASP相关基因mRNA水平升高，且肝脏组织和肝脏巨噬细胞中XBP1s的mRNA与蛋白水平均显著升高。与Xbp1^FL/FL组相比，Xbp1^ΔMφ组上述指标表达均明显降低，同时肝脏组织及肝巨噬细胞中NLRP3的mRNA和蛋白水平明显降低，且肝脏Hippo信号通路激活，YAP的mRNA和蛋白水平升高，p-YAP蛋白水平降低。结论 巨噬细胞XBP1可促进肝脏衰老，Xbp1^ΔMφ可通过降低肝脏炎症水平、激活Hippo信号通路中的YAP蛋白减缓肝脏衰老。

关键词

肝脏 / 衰老 / 慢性炎症 / 巨噬细胞 / X盒结合蛋白 / Yes相关蛋白