抗多房棘球蚴亮氨酸氨基肽酶纳米抗体筛选及原核表达纯化

摘要

目的 筛选抗多房棘球蚴亮氨酸氨基肽酶（Em-LAP）纳米抗体并构建该纳米抗体原核表达系统，表达纯化纳米抗体蛋白，获得高特异性抗多房棘球蚴亮氨酸氨基肽酶的纳米抗体。方法 利用噬菌体文库展示技术（phage library display technology）筛选亮氨酸氨基肽酶纳米抗体，应用phage-ELISA法检测纳米抗体与靶蛋白的亲和力。将亲和力高的抗体测序后，串联目的序列并优化密码子，合成后接入表达载体pET30a做酶切鉴定。将重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株，用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导目的蛋白表达，表达的蛋白经金属螯合亲和层析纯化获得目的蛋白LAPNb。结果 筛选出抗Em-LAP纳米抗体，构建了重组pET30a-LAPNb质粒，得到了一个大小约为28KD的LAPNb蛋白。结论 本研究成功筛选获得了抗Em-LAP纳米抗体，构建了LAPNb原核表达系统，表达纯化了LAPNb蛋白。

关键词

多房棘球蚴 / 纳米 / 抗体 / 亮氨酸氨基肽酶 / 噬菌体文库展示技术