具有M细胞靶向性的多房棘球蚴表位疫苗GILE口服乳酸菌载体的构建

摘要

目的 构建具有M细胞靶向性的多房棘球蚴表位疫苗GILE口服乳酸菌载体。方法本研究在前期构建的多表位疫苗GILE的基础上，通过添加SAM基因序列，设计、合成SAM-GILE序列，构建乳酸菌表达质粒pNZ8148-SAM-GILE，并电转至乳酸乳球菌NZ9000中建立乳酸菌表达体系。用酶切与基因测序双重实验验证乳酸菌表达质粒pNZ8148-SAM-GILE是否构建成功，用PCR验证乳酸菌表达质粒pNZ8148-SAM-GILE是否成功电转至乳酸乳球菌NZ9000，用Western Blot实验检测重组蛋白SAM-GILE是否表达，用全细胞ELISA法检测SAM-GILE的表面展示情况，用免疫荧光染色法鉴定LL-plSAM-GILE的M细胞靶向性。结果 酶切与基因测序双重实验结果显示，乳酸菌表达质粒pNZ8148-SAM-GILE构建成功。经PCR验证，pNZ8148-SAM-GILE成功电转至乳酸乳球菌NZ9000。经Western Blot验证，通过Nisin诱导，成功表达约45 KD的重组蛋白。经全细胞ELISA检测，SAM-GILE可展示于LL-plSAM-GILE表面。经免疫荧光染色验证，重组抗原与M细胞高度重合，表明重组乳酸菌疫苗LL-plSAM-GILE具有M细胞靶向性。结论 成功构建具有M细胞靶向性的多房棘球蚴表位疫苗GILE口服乳酸菌载体。

关键词

多房棘球蚴 / 乳酸菌 / 疫苗 / 口服 / M细胞