藏药砂生槐子总生物碱对血管内皮细胞新生血管生成的作用及对VEGF-A、VEGF-R2表达的影响

摘要

目的 探讨藏药砂生槐子总生物碱（Total alkaloids of Sophora moocrorftiana,TA-SM）对血管内皮细胞新生血管生成的作用及对VEGF-A、VEGF-R2表达的影响。方法 采用CCK8法、Woundhealing法和Flow Cytometry法评价TA-SM与EA.hy926细胞共培养24 h对细胞增殖、迁移、凋亡和周期的影响。采用Western Blot法和RT-qPCR法测定TA-SM处理EA.hy926细胞24 h时对VEGF-A、VEGF-R2蛋白及mRNA相对表达水平的影响。以Sorafenib为阳性对照，以小管的分支数量、总长度、节点数量、主要片段总长度等指标评价TA-SM与HUVEC共培养6 h对小管形成的影响。以血管面积和血管面积百分比等指标评价TA-SM与鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）模型共培养24 h对新生血管生成的影响。结果 1.CCK8结果显示，TA-SM对EA.hy926细胞和HUVEC细胞的增殖效果随着浓度的增加而增强，IC₅₀分别为18.52μg/mL和9.15μg/mL。TA-SM对EA.hy926细胞迁移和凋亡的影响具有时间和浓度依赖性（P<0.05）。实验组较空白对照组EA.hy926细胞的G1期比例显著增高，S期细胞比例显著降低，且具有浓度依赖性（P<0.05）。在小管形成实验中，实验组小管的分支数量、分支总长度、分支节点数量、主要片段总长度均明显下降，其中阳性对照组Sorafenib的浓度高于TA-SM 12.5倍的情况下，抑制小管形成作用更优（P<0.05）。在CAM血管生成实验中，CAM的血管面积和血管面积百分比均有所下降，其中阳性对照组Sorafenib的浓度高于TA-SM 8.3倍的情况下，抑制CAM血管生成作用更优（P<0.05）。2.用TA-SM处理EA.hy926细胞可抑制VEGF-A、VEGF-R2蛋白（P<0.05）和mRNA（P<0.05）的表达。结论 1.TA-SM抑制EA.hy926细胞增殖、迁移，阻滞细胞G1期，诱导凋亡，抑制HUVEC细胞小管的形成、CAM新生血管的生成。2.推测TA-SM可能通过VEGF-A、VEGF-R2信号轴抑制新生血管生成。

关键词

砂生槐子总生物碱 / 血管 / 内皮细胞 / 血管内皮生长因子 / 血管内皮生长因子受体2