中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂在脂多糖诱导的H9c2心肌细胞损伤中的作用及机制

摘要

目的 本研究旨在探讨中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂（Neutrophil Elastase Inhibitor,NEI）在脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）诱导的H9c2心肌细胞损伤中的作用及机制。方法 采用CCK-8法检测药物作用后的细胞活性；通过流式细胞术检测细胞凋亡情况；利用荧光探针技术和荧光显微镜评估线粒体膜电位（Mitochondrial Membrane Potential，ΔΨm）和氧化应激情况；通过荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测相关基因和蛋白表达水平。结果 CCK-8结果显示，NEI显著逆转了LPS导致的H9c2细胞活力下降（P<0.05);Western Blot结果显示，NEI显著抑制了LPS诱导的H9c2细胞中NE蛋白的表达（P<0.05）；流式细胞术结果显示，NEI显著降低了LPS诱导的细胞凋亡率（P<0.05）;DCFH-DA探针检测结果显示，NEI降低了LPS升高的活性氧（Reactive Oxygen Species,ROS）水平和增加的丙二醛（Malondialdehyde,MDA）含量（P<0.05)，同时显著恢复了LPS抑制的超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase,SOD）和谷胱甘肽（Glutathione,GSH）的活性（P<0.05）；ΔΨm的测定结果显示，NEI能够逆转LPS诱导的ΔΨm降低现象（P<0.05）;PCR分析结果显示，NEI促进了LPS处理后细胞内ATP的生成和线粒体DNA(Mitochondrial DNA,mtDNA)含量的增加（P<0.05），并能上调LPS抑制的线粒体生物发生关键基因的mRNA表达水平（P<0.05）。结论 NEI在LPS诱导的H9c2心肌细胞损伤中发挥了保护作用；可能机制为抑制氧化应激、减少细胞凋亡和改善线粒体功能。

关键词

中性粒细胞弹性蛋白酶 / 脂多糖 / 氧化应激 / 线粒体 / 生物 / 凋亡