PEP-1-CAT减轻H9c2细胞缺氧复氧损伤与抑制p38MAKP信号通路有关

摘要

目的：探讨细胞穿透肽PEP-1介导的人过氧化氢酶(CAT)对H9c2细胞缺氧复氧损伤的保护作用及其可能的机制。方法：利用基因工程手段表达和纯化His-tag-PEP-1-CAT及His-tag-CAT融合蛋白。将H9c2细胞随机分为正常对照组(CTL组)、缺氧复氧组(H/R组)、H/R加CAT组(CAT组)、H/R加PEP-1-CAT组(PEP-1-CAT组)。分别向PEP-1-CAT组及CAT组加入2 mol/L的PEP-1-CAT及CAT蛋白500μL处理6 h,将各组细胞置于缺氧箱中缺氧21 h,再复氧6 h,通过CCK-8法监测细胞的增殖率，流式细胞仪检测细胞的凋亡水平和活性氧(ROS)的水平，DCFH-DA探针检测细胞内的ROS变化水平，JC-1试剂盒检测细胞线粒体膜电位的变化。Western blot分析凋亡蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3及p-p38表达量的变化。结果：与H/R组相比，PEP-1-CAT组细胞凋亡率、细胞内ROS水平、Bax、Caspase-3及p-p38表达量均明显下降(P<0.05),细胞增殖率、细胞内线粒体膜电位水平及Bcl-2的表达量升高(P<0.05)。结论：PEP-1-CAT对H9c2细胞缺氧复氧损伤有保护作用，推测机制可能与其抗氧化、抗凋亡作用有关，PEP-1-CAT可通过抑制p38MAPK信号通路阻断Bcl-2/Bax/线粒体凋亡通路。

关键词

PEP-1肽 / 过氧化氢酶 / 缺氧复氧 / 细胞凋亡 / ROS / 线粒体膜电位 / p38MAPK

基金资助

国家自然科学基金资助项目(81270221); 湖北省科技厅重点研发计划(2022BCE007); 十堰市科技局项目(22Y62)