缺氧和高糖对人视网膜色素上皮细胞VEGF₁₆₅及VEGF_165b表达的影响

摘要

目的：通过研究体外培养的人视网膜色素上皮细胞（RPE）在人工模拟的缺氧和高糖环境中VEGF₁₆₅及VEGF_165b表达的情况，探讨VEGF₁₆₅、VEGF_165b在糖尿病视网膜病变（DR）发生发展中的作用及相互之间的关系。方法：正常接种并体外培养人视网膜色素上皮细胞，150μmol/L CoCl₂和25 mmol/L葡萄糖分别模拟细胞缺氧和高糖环境，将接种细胞分为正常组、缺氧组、高糖组、联合组共4组。每组分别于12、24、36、48 h提取RNA和蛋白，RT-PCR法和Western Blot法检测四组RPE细胞VEGF₁₆₅、VEGF_165b的mRNA和蛋白相对表达量，比较缺氧和高糖环境下VEGF₁₆₅和VEGF_165b在人视网膜色素上皮细胞的表达及关系。结果：⑴缺氧和高糖环境下RPE细胞分裂增殖受限，细胞活力降低。⑵VEGF₁₆₅及VEGF_165b mRNA和蛋白的表达情况：在缺氧模型建立后12 h各组细胞间的表达差异无统计学意义，而24、36、48 h时各组细胞的表达差异有统计学意义，其中VEGF₁₆₅mRNA和蛋白在缺氧组、高糖组、联合组的表达随时间变化而逐渐增加且均高于同一时间的正常组，而VEGF_165b mRNA和蛋白的表达则随时间变化而逐渐减少且均低于同一时间的正常组，差异均有统计学意义（P均<0.05）。⑶联合组的VEGF₁₆₅ mRNA和蛋白表达较缺氧组、高糖组表达增加更多，缺氧组与高糖组比较只在24 h时间点差异有统计学意义；而联合组的VEGF_165b mRNA和蛋白的表达较缺氧组、高糖组的表达降低更多，缺氧组与高糖组比较差异无统计学意义。结论：体外培养RPE细胞能够正常表达VEGF_165b,缺氧和高糖在转录水平诱导VEGF₁₆₅mRNA和蛋白的表达上调，同时降低VEGF_165bmRNA和蛋白的表达量。将促血管生成的VEGF₁₆₅转换为抑制血管生成的VEGF_165b将有望成为DR的治疗新思路。

关键词

VEGF₁₆₅ / VEGF_165b / 糖尿病视网膜病变 / 视网膜色素上皮细胞

基金资助

十堰市科技局引导性科研项目(22Y71)