基于Nrf2/HO-1信号通路探究SS31肽对川崎病冠状动脉损伤的保护作用

廉应聪; 梁夏炎; 焦蓉

doi:10.13819/j.issn.2096-708X.2025.04.008

湖北医药学院学报 ›› 2025, Vol. 44 ›› Issue (4) : 426 -432+440. DOI: 10.13819/j.issn.2096-708X.2025.04.008

基于Nrf2/HO-1信号通路探究SS31肽对川崎病冠状动脉损伤的保护作用

廉应聪, 梁夏炎, 焦蓉

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摘要

目的：本研究旨在探讨SS31通过激活Nrf2/HO-1信号通路，抑制川崎病模型中人冠状动脉内皮细胞(HCAECs)氧化损伤及炎性反应的作用机制。方法：体外培养人冠状动脉内皮细胞，采用TNF-α诱发人类冠状动脉内皮细胞炎性反应构建川崎病疾病细胞模型，将细胞分为4组：对照组、TNF-α组、TNF-α+SS31(200 nmol/L)、TNF-α+SS31(400 nmol/L)。采用CCK-8法检测TNF-α(0～100 ng/mL)及SS31(0～800 nmol/L)对HCAECs存活率的剂量效应。采用RT-qPCR法检测Nrf2、HO-1及NLRP3、IL-1β、IL-6的mRNA表达。Western Blot法检测Nrf2、HO-1及NLRP3、IL-1β、IL-6的蛋白表达。DCFH-DA荧光探针检测细胞内ROS水平变化。结果：CCK-8结果显示，与对照组相比，SS31在0～400 nmol/L浓度范围内对HCAECs未产生显著细胞毒性(存活率>95%,P>005),但在800 nmol/L时存活率骤降(P<0.01)。与对照组相比，<50 ng/mL时细胞活性维持正常(P>0.05),而50 ng/mL处理使存活率降低(P<0.01)。蛋白质表达分析显示，TNF-α组Nrf2与HO-1水平均较对照组下降(P<0.05)。SS31干预后显著逆转此现象，Nrf2、HO-1表达均明显上调(P<0.001)。DCFH-DA荧光探针检测显示，TNF-α组ROS荧光强度较对照组升高，呈现高强度弥散信号；SS31处理使荧光强度回落，且分布趋于胞质极性化。RT-PCR证实TNF-α组NLRP3、IL-1β及IL-6 mRNA水平升高，而SS31干预后则显著下降(均P<0.001)。免疫印迹显示TNF-α组NLRP3、IL-1β及IL-6蛋白表达分别上调(均P<0.05),SS31处理后三者均降低(均P<0.01)。结论：SS31可以通过激活Nrf2/HO-1信号通路，抑制TNF-α诱导的HCAECs氧化损伤及炎症级联反应，提示其可能通过抗氧化-抗炎机制改善KD相关冠状动脉内皮功能障碍。