近红外荧光蛋白mNeptune684的结晶与结构解析

袁也

doi:10.13819/j.issn.2096-708X.2026.04.002

湖北医药学院学报 ›› 2026, Vol. 45 ›› Issue (4) : 414 -418+434. DOI: 10.13819/j.issn.2096-708X.2026.04.002

近红外荧光蛋白mNeptune684的结晶与结构解析

袁也

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摘要

目的:建立近红外荧光蛋白mNeptune684的纯化与结晶体系，解析其高分辨率结构，阐明光谱红移机制，为近红外荧光蛋白定向进化提供结构依据。方法:以mNeptune684及同源蛋白为研究对象，经镍柱亲和层析联合分子排阻色谱纯化，通过坐滴法与悬滴法筛选结晶条件，X射线单晶衍射解析结构并分析红移机制。结果:mNeptune684在0.2 mol/L氯化锂、20%w/v聚乙二醇3350条件下获得高质量单晶，结构分辨率2.0Å,属P2₁空间群，Asn143与Asn158的协同氢键网络拓展发色团共轭平面，部分氨基酸二级结构转变，共同导致发射波长红移34nm。结论:成功建立mNeptune684结晶体系，明确其光谱红移关键机制，为近红外荧光蛋白的理性设计与定向进化提供结构靶点。