牙龈卟啉单胞菌FimA通过P62介导的自噬促进MHC-Ⅱ的降解

摘要

目的 探讨牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,Pg）感染食管鳞状细胞癌后对主要组织相容性Ⅱ类分子（major histocompatibility complex classⅡ,MHC-Ⅱ）的影响及其免疫调控机制。方法 采用组织免疫荧光检测不同处理组食管癌组织中MHC-Ⅱ的表达水平以及CD8⁺T细胞的浸润情况；采用细胞免疫荧光染色，观察各组P62、FimA（fimbriae,主要毒力因子鞭毛蛋白）与Lamp1（溶酶体相关膜蛋白，lysosome-associated membrane protein 1）和MHC-Ⅱ的共定位情况；Western blot检测Pg感染KYSE150细胞后P62及MHC-Ⅱ的表达水平；采用流式细胞术检测Pg阴性以及Pg阳性的KYSE150与外周单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells, PBMCs）共培养条件下不同分组中Granzyme B、Perforin表达情况。结果 免疫荧光显示与Pg阴性的组织相比，Pg阳性的组织中MHC-Ⅱ表达量显著减少，同时T细胞浸润也显著减少；细胞荧光共定位显示与单纯Pg感染组相比，加入2-BP（棕榈酰化转移酶抑制剂）组和shZDHHC8（转染慢病毒质粒敲降ZDHHC8）组中P62、FimA与Lamp1共定位程度减弱；与单纯Pg感染组相比，敲降P62（shP62）组中P62、FimA与MHC-Ⅱ共定位程度减弱。Western blot显示Pg感染KYSE150细胞后MHC-Ⅱ的表达量减少，敲降P62后可恢复MHC-Ⅱ的表达。流式细胞术结果显示，Pg感染组CD8⁺T细胞表面杀伤性分子表达显著降低（Gzmb、Perforin）,加入2BP组、shP62组及加入氯喹（CQ）组可以恢复部分表达。结论 FimA可能通过棕榈酰化修饰激活P62介导的自噬，招募MHC-Ⅱ至溶酶体降解，抑制T细胞的免疫应答，参与免疫抑制与肿瘤进展。

关键词

食管鳞状细胞癌 / 牙龈卟啉单胞菌 / 自噬