一种提取原代皮层神经元并建立神经突起损伤模型的方法

摘要

目的 研究一种分离培养小鼠皮层神经元并建立神经突起损伤的方法。方法 选取24 h内出生的乳鼠，超净台分离大脑皮层组织后培养7 d,使用含15 ng/mL的Nogo-66神经元培养基培养3 h、6 h、9 h、12 h。使用免疫荧光共染色技术鉴定细胞纯度和神经突起损伤免疫荧光强度；CCK-8检测Nogo-66干预后原代皮层神经元细胞存活率；Western blot检测生长相关蛋白43(growth-associated protein-43,GAP-43)、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)蛋白表达。结果 体外细胞DAPI、β-tubulin和MAP-2共阳性标记的原代皮层神经元细胞数>90%。Nogo-66 3 h对小鼠原代皮层神经元最长突起长度及一级突起数量无影响(P>0.05);当Nogo-66 6 h、9 h、12 h时，皮层神经元最长突起长度及一级突起数量较对照组显著下降(P<0.001)。CCK-8结果显示Nogo-66 3 h对细胞存活率无影响(P>0.05);Western blot结果显示Nogo-66 3 h可以降低GAP-43蛋白表达(P<0.05)。结论15 ng/mL Nogo-66干预3 h会损伤神经元突起，为临床治疗中风提供了实验基础。

关键词

中枢神经损伤 / 突起损伤 / 神经元

基金资助

国家自然科学基金(8186050427); 重庆市科技局自然基金面上项目(cstc2021jcyj-msxmX1084)