哇巴因通过G6PD通路调节糖酵解影响结肠癌细胞增殖的机制研究

摘要

为探究哇巴因（ouabain）抑制结肠癌细胞HCT116增殖的作用机制，采用CCK-8法、细胞克隆形成实验、EdU实验和流式细胞术，分别检测了增殖能力、细胞克隆形成、DNA复制活性及凋亡率，以考察哇巴因对结肠癌细胞HCT116体外细胞活力的影响．为进一步分析哇巴因对结肠癌细胞HCT116糖酵解的影响，使用葡萄糖氧化酶法和乳酸检测试剂盒，检测了细胞葡萄糖消耗水平和乳酸生成水平的变化．此外，还探讨了哇巴因调控结肠癌细胞HCT116糖酵解的机制，通过real-time PCR分析其对相关代谢途径因子m RNA表达的影响，并通过Western Blot检测糖代谢相关蛋白G6PD的表达变化．结果表明：与对照组相比，哇巴因能显著抑制结肠癌细胞HCT116的增殖、克隆形成能力以及DNA复制活性（P<0.01），其IC₅₀值为50 nmol/L，并呈现浓度依赖性．同时，哇巴因能显著诱导结肠癌细胞HCT116凋亡（P<0.01），并显著抑制结肠癌细胞HCT116的糖酵解，降低此代谢途径中相关因子mRNA的表达水平（P<0.01）.Western Blot、realtime PCR和G6PD酶活力检测实验结果显示：与对照组相比，哇巴因可以显著降低结肠癌细胞HCT116中G6PD的mRNA和蛋白质表达水平以及G6PD酶活性（P<0.01）．综上所述，哇巴因可显著抑制结肠癌细胞HCT116的增殖，促进其凋亡并显著降低其糖酵解水平；其可能的机制与抑制G6PD信号通路有关，提示哇巴因可能成为治疗结肠癌的潜在候选药物，为结肠癌的治疗提供了新的思路和可能．

关键词

哇巴因 / 糖酵解 / G6PD / 结肠癌 / 增殖