巴西苏木素对MRSA丙氨酸消旋酶抑制作用的初步研究

黎瑞; 陈泽慧; 周小仙; 余孟飞; 杨智芳; 李明哲

doi:10.14169/j.cnki.zunyixuebao.2024.0001

遵义医科大学学报 ›› 2024, Vol. 47 ›› Issue (01) : 47 -52+61. DOI: 10.14169/j.cnki.zunyixuebao.2024.0001

巴西苏木素对MRSA丙氨酸消旋酶抑制作用的初步研究

黎瑞, 陈泽慧, 周小仙, 余孟飞, 杨智芳, 李明哲

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摘要

目的探讨巴西苏木素(BN)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)丙氨酸消旋酶(Alr)的抑制作用。方法 PCR扩增MRSA丙氨酸消旋酶基因Alr,通过使用酶切和连接技术构建重组表达质粒pET-28a-Alr,然后将其转化至E.coil BL21(DE3)中，利用IPTG诱导表达Alr,并通过镍离子亲和层析法进行纯化；试验分为对照组MOCK(不作任何处理)、不同浓度BN组(8、16、32、64μg/mL),分别测定不同浓度BN对Alr活性的影响；通过细胞热位移分析(CETSA)实验测定BN对Alr蛋白热稳定性的影响；利用软件AutoDock Vina将BN与Alr进行分子对接，预测两者之间的结合模式。结果成功诱导表达纯化Alr蛋白，且其具备将L-丙氨酸外消旋为D-丙氨酸的活性。与对照组相比，不同浓度的BN均能够抑制Alr的活性，其中在64μg/mL BN作用下，抑制率达到50%(P<0.0001)。CETSA实验结果显示，在55.9～59.5℃下BN处理后的Alr蛋白热稳定性明显高于Mock组(P<0.0001)。分子对接结果显示BN与Alr之间的结合能为-8.0 kcal/mol,与Alr活性位点内的Gly221、Phe169、Arg219、Ser204、Ile222和Tyr43形成氢键，与其活性位点通道的Ile352、Tyr354形成π-π键及疏水作用，与Asn203形成疏水作用。结论 BN对Alr的活性具有抑制作用，可能是因为BN与Alr蛋白活性位点处的结合能力相关。