铜绿假单胞菌单PilZ结构域蛋白PA0012和PA4324突变体生物学表型的初步筛选

摘要

目的 本研究以铜绿假单胞菌单PilZ结构域的环二鸟苷酸受体蛋白PA0012和PA4324为研究对象，研究这2个蛋白对生物学表型的影响。方法 本研究首先利用同源重组的方法对编码PA0012和PA4324蛋白的基因进行了敲除，得到敲除突变体菌株ΔPA0012和ΔPA4324。然后，将实验分为3组，以野生型菌株PAO1为对照，用这2个突变体进行了表型筛选，包括群集运动能力、感染生菜的能力、对线虫的致病力和蛋白酶活性等，采用单因素方差分析对各组间的差异进行统计分析。随后对这2个突变体和野生型菌株进行了RNA测序，分析2个单PilZ结构域蛋白突变导致的基因差异表达，在转录水平上综合分析2个蛋白对生物学表型的影响。结果 本研究发现这2个单PilZ结构域蛋白的突变均能导致铜绿假单胞菌的群集运动增强，感染生菜的能力减弱，对线虫的毒性和蛋白酶活性的影响则无显著变化。RNA测序结果表明，这2个蛋白突变均可导致铜绿假单胞菌中大量基因的差异表达，且有一些共同的差异基因。结论 铜绿假单胞菌的PA0012和PA4324突变均能增强其群集运动和减轻其对生菜的感染，为后续机制研究奠定了基础。

关键词

铜绿假单胞菌 / PilZ / 环二鸟苷酸 / 生物学表型 / RNA测序

基金资助

贵州省科技计划项目[NO:黔科合基础-ZK(2022)一般604]; 贵州省教育厅高等学校科学研究青年项目[NO:黔教技(2022)236号]; 遵义市科技计划项目[遵市科合HZ字(2023)171号]