20-HETE通过GPR75受体偶联G_αq信号通路诱导H9c2心肌细胞凋亡的作用

摘要

目的 探讨GPR75受体偶联G_αq信号通路在20-HETE诱导的H9c2心肌细胞凋亡中的作用与机制。方法 H9c2心肌细胞采用慢病毒载体干扰GPR75表达，敲减效率通过RT-qPCR和Western blot法检测；ELISA法检测IP₃及cAMP含量；TUNEL法评估细胞凋亡率；分别使用Fluo-4/AM、DHE和JC-1荧光探针检测细胞内Ca²⁺浓度、ROS含量以及线粒体膜电位（ΔΨm）水平；Western blot检测EGFR、ERK1/2、AKT、GSK3β、Bax、Bcl-2、Cyt C、Caspase-3蛋白表达。结果 慢病毒载体shGPR75转染后，H9c2心肌细胞GPR75受体mRNA和蛋白表达分别降低67.16%和63.99%（P<0.05）。敲减GPR75表达或应用AAA阻断其作用，显著抑制20-HETE诱导的H9c2心肌细胞凋亡（P<0.05）,并可逆转ΔΨm下降及凋亡相关蛋白Bax、Cyt C、Caspase-3蛋白表达增高（P<0.05）。20-HETE处理后细胞内IP₃含量明显增加（P<0.05）,但对cAMP生成无显著影响（P>0.05）,而敲减GPR75表达、应用AAA或者PLC信号通路阻断剂U73122预处理后，可显著阻断细胞内IP₃生成（P<0.05）。敲减GPR75表达、应用AAA或者U73122预处理后，明显抑制20-HETE诱导的Ca²⁺浓度升高和ROS生成效应（P<0.05）。20-HETE处理后，GPR75受体下游调控关键蛋白EGFR、ERK1/2、AKT、GSK3β磷酸化水平明显升高（P<0.05）,敲减GPR75表达或应用AAA可有效阻断20-HETE上述效应（P<0.05）。最后，阻断PLC或PI3K信号通路，显著抑制20-HETE诱导的心肌细胞凋亡（P<0.05）。结论 20-HETE通过GPR75受体偶联的G_αq蛋白及其介导的PLC、EGFR/ERK1/2/AKT/GSK3β信号通路诱导H9c2心肌细胞凋亡。

关键词

20-羟二十烷四烯酸 / G蛋白偶联受体75 / G_αq蛋白 / 心肌细胞凋亡

基金资助

国家自然科学基金资助项目(NO:32060201); 遵义医科大学研究生科研基金课题(NO:ZYK167);遵义医科大学大学生创新创业训练计划项目(NO:S202310661002)