circGLS抑制非小细胞肺癌细胞恶性表型的作用研究

摘要

目的 明确circGLS的环状RNA特性及其环化位点，研究circGLS对NSCLC细胞恶性表型的影响。方法 采用Northern-Blot、RNase R耐受实验检测circGLS的耐RNase R消化特性，使用Sanger测序明确其环化位点。分别使用Vector、OE-circGLS慢病毒感染H460和H1299细胞，使用sh-NC及sh-circGLS感染A549和H1975细胞，分组为Control组、Vector组、OE-circGLS组、sh-NC组和sh-circGLS组。采用CCK-8、流式细胞术、划痕和Transwell实验检测上述分组中细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭情况。结果 Northern-Blot、RNase R消化和Sanger测序实验证实了circGLS耐受RNase R消化，且环化位点为“GA”。RT-qPCR结果证实细胞模型构建成功。CCK-8结果显示，H1299和H460细胞72 h OE-circGLS组细胞活力分别为0.88和0.9;A549和H1975细胞72 h sh-circGLS组活力均为1.13(Vector组和sh-NC组细胞活力均一化为1)。划痕实验结果显示，H460和H1299细胞愈合率分别为：OE-circGLS组vs Vector组=2.42%vs 5.57%和12.09%vs 25.07%; A549和H1975细胞愈合率分别为：sh-circGLS组vs sh-NC组=19.00%vs 13.81%和30.69%vs 21.53%。Transwell实验结果显示，H460细胞和H1299细胞迁移率(OD)分别为：OE-circGLS组vs Vector组=0.94 vs 1.01和0.57 vs 0.92;H1975细胞和A549细胞迁移率(OD)分别为：sh-circGLS组vs sh-NC组=1.044 vs 0.95和1.29 vs 1.09。流式细胞术结果显示，H1299细胞和H460细胞凋亡率分别为：OE-circGLS组vs Vector组=14.45%vs 7.54%和10.74%vs 1.79%;A549细胞和H1975细胞凋亡率分别为：sh-circGLS组vs sh-NC组=8.57%vs 9.52%和2.47%vs 4.95%。上述结果表明，过表达circGLS可以显著抑制NSCLC细胞增殖、迁移和侵袭，且促进其凋亡，而敲低circGLS得到相反的结果。结论 circGLS是一个真实存在的环状RNA,具有抑制NSCLC细胞恶性表型的功能，是潜在的非小细胞肺癌治疗靶点。

关键词

环状RNA / circGLS / 非小细胞肺癌 / 恶性表型

基金资助

国家自然科学基金资助项目(NO:81960532); 贵州省科技计划资助项目[NO:黔科合基础-ZK(2022)一般644]; 遵义医科大学附属医院博士科研启动基金[NO:院字(2019)05号]