高产乙醇肺炎克雷伯adhE缺失菌株构建及对其产乙醇能力的影响

摘要

目的 探究基因adhE缺失对高产乙醇肺炎克雷伯菌株生长能力，乙醇脱氢酶活性及产乙醇能力的影响。方法 以高产乙醇肺炎克雷伯菌株TH1为背景，利用温敏型质粒介导的同源重组技术构建基因adhE的缺失菌株。通过PCR扩增获取基因adhE片段并构建于pGEM-Teasy表达载体获得回补质粒，导入ΔadhE缺失菌株得到回补菌株，并将pGEM-Teasy空质粒导入高产乙醇肺炎克雷伯野生菌株及ΔadhE缺失菌株作为空载对照。在液体LB培养基中测定各菌株的生长曲线，使用试剂盒检测各菌株的乙醇脱氢酶活性并通过顶空法检测各菌株的乙醇产量。结果 使用PCR技术明确ΔadhE缺失菌株与相关回补菌株构建成功。基因adhE缺失后，厌氧条件下高产乙醇肺炎克雷伯菌株的生长速度显著降低，而回补菌株的生长速度显著升高(P<0.05)。同时，相比于野生型菌株，ΔadhE缺失菌株的乙醇脱氢酶活性与乙醇产量显著降低，而回补菌株的乙醇脱氢酶活性与乙醇产量恢复到了野生型菌株的水平(P<0.05)。结论 基因adhE的缺失减缓了高产乙醇肺炎克雷伯菌株厌氧条件下的生长速度，同时显著降低了高产乙醇肺炎克雷伯菌株的产乙醇能力。

关键词

肺炎克雷伯菌 / 基因敲除 / 乙醇脱氢酶E / 乙醇