PCL-PEG-HAAM复合支架的构建及其对人牙周膜干细胞增殖、黏附及成骨分化的影响

摘要

目的 初步探究PCL-PEG-HAAM支架的制备方法，以及复合支架对人牙周膜干细胞(PDLSCs)增殖、黏附及成骨分化的影响。方法 通过生物酶/化学/机械联合的方法对人羊膜(HAM)进行脱细胞制备人脱细胞羊膜(HAAM),采用0.1%明胶作为黏附介质将聚己内酯-聚乙二醇(PCL-PEG)与HAAM整合，构建PCL-PEG-HAAM复合支架，并通过扫描电镜观察其显微结构。酶消化法培养PDLSCs,流式细胞术及多向诱导分化(成骨、成脂、成软骨)对PDLSCs进行鉴定。实验分组：Control组、PCL-PEG组、HAAM组、PCL-PEG-HAAM组，选取第3代PDLSCs分别进行CCK-8实验、BCIP/NBT染色、茜素红染色以及WB检测成骨相关蛋白(RUNX2、ALP、COL1)的表达；此外，还将第3代PDLSCs负载于PCL-PEG、HAAM、PCL-PEG-HAAM进行细胞粘附实验，通过以上实验检测PDLSCs在各组支架上的生物学性能及成骨分化的能力。结果 去除羊膜上皮细胞的HAAM完整保留了基底层和致密层，扫描电镜下见基底层表面完整无剥脱，致密层胶原纤维相互交织呈多孔蜘蛛网状结构；PCL-PEG-HAAM复合支架为双层膜结构，两者间可见明显交界线，HAAM与下方呈“渔网状”的PCL-PEG纳米纤维紧密连接。CCK-8结果显示第7天时PCL-PEG-HAAM组细胞增殖速率高于PCL-PEG组(P<0.05);PCL-PEG-HAAM组的细胞粘附率高于PCL-PEG组(P<0.05);BCIP/NBT染色和茜素红染色结果显示PCL-PEG、HAAM、PCL-PEG-HAAM支架均能促进PDLSCs的成骨分化，其中，PCL-PEG-HAAM组染色面积最深最广；WB结果显示PCL-PEG-HAAM组RUNX2、COL1、ALP成骨蛋白表达量显著高于Control组、PCL-PEG组(P<0.05)。结论 PCL-PEG-HAAM复合支架促进了PDLSCs增殖、黏附及成骨分化，是一种具有开发潜力的口腔生物膜。

关键词

人脱细胞羊膜 / 静电纺丝 / 引导骨组织再生 / 引导组织再生 / 聚己内酯-聚乙二醇-人脱细胞羊膜 / 牙周组织再生