Bscl2基因敲除对细胞增殖和DNA损伤修复能力的影响

摘要

目的 探讨Bscl2基因敲除对细胞增殖和DNA损伤修复能力的影响。方法 构建Bscl2基因敲除小鼠模型，胰酶消化法分离胚胎发育14.5 d (E14.5 d)的MEF细胞；免疫荧光染色法对分离培养的MEF细胞进行纯化鉴定；PCR扩增技术结合琼脂糖凝胶电泳对培养细胞及小鼠基因型进行鉴定，并将细胞及小鼠分为野生组(WT wild type)及Bscl2基因敲除组(KO knockout);使用台盼蓝染色法和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)免疫荧光标记法检测两组细胞增殖能力；用γH2AX免疫荧光染色法评估两组细胞及小鼠组织在双链断裂损伤诱导后的DNA损伤修复能力。结果 分离E14.5 d MEF细胞，成功构建小鼠MEF细胞系。Bscl2基因敲除MEF细胞的增殖能力明显低于野生型，Bscl2基因敲除MEF细胞及小鼠活体组织的DNA损伤修复能力较野生型明显减弱。结论 敲除Bscl2基因抑制小鼠MEF细胞的增殖，降低小鼠细胞及组织的DNA损伤修复能力。

关键词

先天性脂肪营养不良2型基因 / 胚胎成纤维细胞 / 细胞增殖 / DNA双链断裂 / DNA修复