Rnase Y影响金黄色葡萄球菌氟喹诺酮类抗生素耐药性及生物被膜的机制

摘要

目的 研究核糖核酸内切酶Ranse Y编码基因rny在金黄色葡萄球菌中的功能。方法 以金黄色葡萄球菌NCTC8325为背景菌株，使用温敏质粒T1PBTS对rny基因进行敲除，使用表达质粒pCN51对Δrny缺失菌株进行回补。通过PCR技术对Δrny和pCN51-rny/Δrny菌株进行验证。最小抑菌浓度(MIC)实验明确WT、Δrny、pCN51/Δrny和pCN51-rny/Δrny菌株对抗生素的耐药性。通过结晶紫实验测定WT、Δrny、pCN51/Δrny和pCN51-rny/Δrny菌株生物被膜的形成能力。转录组测序分析及qRT-PCR技术明确rny基因缺失影响金黄色葡萄球菌氟喹诺酮耐药及生物被膜形成的具体机制。结果 PCR结果表明Δrny缺失菌株及pCN51-rny/Δrny回补菌株构建成功。最小抑菌浓度实验结果表明Δrny缺失菌株对氟喹诺酮类抗生素的耐药性升高，pCN51-rny/Δrny回补菌株可以回复这一表型，pCN51/Δrny空质粒无法回复该表型。结晶紫染色实验结果发现，Δrmy缺失菌株生物被膜形成能力显著提高。转录组测序及qRT-PCR实验初步表明rny基因的缺失，导致氟喹诺酮抗生素相关外排泵基因norB及生物被膜相关基因ica操纵子基因的表达上调。结论rny基因缺失通过调控norB及ica操纵子的表达，影响金黄色葡萄球菌对氟喹诺酮类抗生素的耐药性及生物被膜的形成。

关键词

金黄色葡萄球菌 / Rnase Y / 氟喹酮类抗生素 / 耐药性 / 生物被膜