TFAP2A对IgA肾病相关基因CCDC69转录调控机制研究

摘要

目的 探究转录因子TFAP2A与CCDC69启动子区特异性结合及TFAP2A对IgA肾病相关基因CCDC69的转录调控机制。方法 利用GDS3712高通量数据集分析肾小球硬化肾组织RNA-Seq数据中CCDC69及TFAP2A RNA相对表达量，Trizol法提取IgAN患儿外周血TFAP2A及CCDC69 RNA,qPCR法检测RNA表达量改变，通过双萤光素酶报告基因实验验证TFAP2A对CCDC69基因启动子水平的调控作用。采用实时荧光定量PCR检测TFAP2A siRNA及TFAP2A过表达质粒转染细胞后TFAP2A、CCDC69 mRNA表达水平，采用蛋白免疫印迹检测TFAP2A、CCDC69蛋白表达水平。采用染色质免疫沉淀试验验证TFAP2A与CCDC69启动子的特定区域结合情况。结果 GDS3712高通量数据集分析肾小球硬化肾组织中CCDC69表达量升高，TFAP2A表达量下降，Trizol法提取IgAN患儿外周血TFAP2A及CCDC69 RNA,qPCR法检测TFAP2A表达量下降，CCDC69表达量上升。双萤光素酶报告基因实验证明TFAP2A siRNA浓度为10、15μmol/L的CCDC69启动子相对萤光素酶活性增强(P<0.01),TFAP2A过表达质粒质量浓度为100、300μg/L的CCDC69启动子萤光素酶活性降低(P<0.05)。与Control siRNA组相比，TFAP2A siRNA组CCDC69 mRNA和蛋白表达水平升高；与pENTER质粒组比较，TFAP2A过表达质粒组CCDC69 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05)。染色质免疫沉淀实验证实TFAP2A与CCDC69启动子的特定区域结合。结论 转录因子TFAP2A与CCDC69启动子区特异性结合并负向调控CCDC69基因表达，本研究发现了调控IgA肾病重要基因的转录因子新成员。

关键词

IgA肾病 / TFAP2A / 启动子 / CCDC69 / 转录调控