路路通低聚糖的分离及抗氧化、抗肝纤维化和心肌保护活性研究

摘要

目的 充分挖掘路路通活性聚糖，评价其生物学功能。方法 采用水提醇沉法提取粗聚糖，并经大孔吸附树脂、DEAE-52纤维素阴离子交换层析及G-150凝胶过滤层析进行分离纯化；通过系列光谱、色谱与化学方法对其结构进行初步表征；采用体外自由基清除法评价了其抗氧化活性；通过在人肝星状细胞系(LX2)中测定细胞活性确定了其安全浓度；利用TGF-β诱导的LX2细胞活化模型，评价了其抗肝纤维化活性；利用阿霉素诱导的大鼠心肌细胞系H9c2(2-1)损伤模型，评估了其心肌细胞保护作用。结果 从路路通中分离纯化得到一种中性低聚糖LfPs2-2,平均分子量为1.3×10～3 Da。单糖组成分析显示，LfPs2-2由甘露糖、鼠李糖和葡萄糖以摩尔比30.55∶57.12∶11.93构成。甲基化分析表明，其主链主要由→4)-Manp-(1→、→6)-Glcp-(1→和→2,3,4)-Manp-(1→等残基连接而成，其中→2,3,4)-Manp-(1→为关键结构单元。形貌观察表明，LfPs2-2呈片状聚集，表面具有褶皱与团簇颗粒。安全性评价显示，该低聚糖(≤100μg/mL)对细胞无显著毒性，对细胞增殖活性无明显抑制。在功能评价方面，LfPs2-2展现出中等强度的体外抗氧化活性：4.00 mg/mL浓度下，清除率为(45.54±4.66)%。更重要的是，LfPs2-2表现出显著的抗肝纤维化活性。在TGF-β诱导的LX-2细胞活化模型中，LfPs2-2能显著的下调肝纤维化关键标志物COL-1和α-SMA的表达水平(P<0.01)。机制研究表明，LfPs2-2通过靶向抑制胶原蛋白脯氨酰4-羟化酶1(C-P4H1)的表达，干扰了胶原蛋白的羟基化修饰与后续成熟过程。此外，LfPs2-2还能有效减轻阿霉素诱导的心肌细胞毒性。结论 本研究从路路通中成功分离鉴定出一种具有高纯度与特定结构的低聚糖LfPs2-2,并证实其是一种很有潜力的天然活性物质，为路路通的高值化利用提供了科学依据，尤其在开发新型心肌细胞保护剂和抗肝纤维化药物方面展现出重要的应用前景。

关键词

路路通低聚糖 / 结构表征 / 抗氧化 / 抗肝纤维化 / 心肌保护