建立多色探针熔解曲线技术单管同步检测6种呼吸道病原体方法

摘要

目的 建立多色探针熔解曲线分析技术单管同步检测甲型流感病毒(IAV)、乙型流感病毒(IBV)、新型冠状病毒(SARS-CoV-2)、人鼻病毒(HRV)、肠道病毒(EV)、呼吸道合胞病毒(RSV) 6种呼吸道病原体的方法。方法 对6种病原体的保守区域进行特异性引物探针设计，并对反应体系和反应程序进行优化，采用优化好的条件进行灵敏度、特异性、临床样本初步应用进行评估。结果 该方法对IAV、EV、HRV、RSV检测下限为30 copies/mL,IBV、SARS-CoV-2检测下限为300 copies/mL,重复性实验变异系数小于0.5%,特异性实验只有目标病原体的阳性样本检出，非目标病原体均未检出。临床样本检测与荧光定量PCR进行对比，对6种病原体的阴性符合率100%,IAV、IBV、HRV阳性符合率为100%(Kappa=1),SARS-CoV-2阳性符合率为93.33%(Kappa=0.97)、EV阳性符合率为96.00%(Kappa=0.98)、RSV阳性符合率为94.12%(Kappa=0.98),表明两种检测方法之间具有极高的一致性。结论 初步建立单管同步检测呼吸道中6种病原体检测方法，该方法利用不同荧光标记探针的熔解温度(Tm)差异实现多重区分，实现单管、单次反应中同步检测6种病原体，显著提升检测效率并降低试剂成本，具有灵敏度较高、特异性强、重复性好的特点，可用于同步检测呼吸道中6种病原体。

关键词

探针熔解曲线技术 / 呼吸道病原体 / 检测技术