M2表型骨髓来源巨噬细胞外泌体促进神经胶质瘤免疫逃逸及PD-1抑制剂抗性的免疫机制

摘要

目的 探讨M2表型骨髓来源巨噬细胞外泌体在促进神经胶质瘤免疫逃逸及PD-1抑制剂抗性中的免疫机制。方法 建立M0、M1、M2型肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）与GL261或K-Luc胶质瘤细胞的共培养体系，并提取不同TAMs来源外泌体（Exo）进行细胞处理。采用ELISA检测IFN-γ、IL-8、IL-12水平；通过慢病毒介导IFN-γ过表达或敲低，建立C57BL/6J小鼠脑瘤模型，联合强力霉素及PD-1抗体处理。利用排水法测定脑瘤体积，并以流式细胞术分析瘤内CD8⁺PD-1⁺T细胞比例。多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用事后Tukey’s检验进行。结果 与M0型及M1型TAMs相比，M2型TAMs显著促进GL261与K-Luc细胞增殖（P<0.05）;M2-Exo处理的细胞中IL-8、IFN-γ水平升高，IL-12降低（P<0.05）。体内实验显示，IFN-γ过表达（Lenti-IFN-γ-OE）组脑瘤体积明显增大，敲低（Lenti-IFN-γ shRNA）组脑瘤体积减小（F=168.80,P<0.01,n=8）。联合PD-1抗体时，IFN-γ过表达组瘤体积进一步增大（F=599.40,P<0.01,n=8）,且CD8⁺PD-1⁺T细胞浸润增加，而敲低组则相反（F=920.10,P<0.01,n=8）。结论 M2型骨髓来源巨噬细胞外泌体中高表达的IFN-γ可增强胶质瘤免疫抑制微环境，促进CD8⁺PD-1⁺T细胞浸润，诱导PD-1抑制剂抗性，为神经胶质瘤免疫治疗提供潜在干预靶点。

关键词

神经胶质瘤 / PD-1抑制剂抗性 / M2表型骨髓来源巨噬细胞 / 外泌体 / γ-干扰素