长波紫外线对人黑素瘤细胞中视蛋白3的表达及细胞增殖的影响

摘要

目的 研究长波紫外线对人黑素瘤细胞中视蛋白3(OPN3)的表达及对细胞增殖的影响。方法 利用不同剂量的UVA分别照射人黑素瘤细胞系(A375细胞和MV3细胞)后，通过5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)实验及细胞增殖与活性检测试剂(CCK-8)检测照射前后细胞的增殖情况，实时荧光定量(RT-qPCR)分别检测细胞中视蛋白(OPN)的mRNA表达水平；利用慢病毒技术分别沉默和过表达A375细胞和MV3细胞中的OPN3,采用EdU实验及CCK-8方法检测细胞的增殖水平；沉默A375细胞和MV3细胞中OPN3后进行UVA照射，通过EdU及CCK-8方法检测照射前后细胞增殖的变化；采用转录组测序技术检测过表达及沉默OPN3的MV3细胞中差异基因的表达，并进行KEGG富集相关信号通路分析，免疫印迹法(Western blot)验证Hippo信号通路相关蛋白的表达情况。结果 与Control组相比，UVA照射组中的细胞增殖能力明显增强(P<0.05);RT-qPCR结果显示，OPN1、OPN2、OPN3、OPN4以及OPN5在A375和MV3细胞中均有表达，其中OPN3的转录表达水平水平均明显高于其他OPN(P<0.05);UVA照射组中A375和MV3细胞OPN3蛋白表达水平明显升高，沉默OPN3的表达后，A375和MV3细胞的增殖能力减弱，过表达OPN3后A375和MV3细胞的增殖能力增强(P<0.05);沉默人黑素瘤细胞(A375细胞和MV3细胞)OPN3后经UVA照射，细胞增殖能力较单纯照射UVA时降低(P<0.05);沉默及过表达MV3细胞中OPN3的表达后，RNA-seq测序结果筛选出141个差异基因，KEGG分析筛选差异基因富集信号通路9条，其中-Log10(FDR)值最高的为Hippo信号通路；沉默OPN3后，检测到LATS1表达水平增加，p-YAP、YAP、RhoA蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论 UVA可促进人黑素瘤细胞系(A375细胞和MV3细胞)OPN3的表达，并通过Hippo信号通路调控细胞的增殖过程。

关键词

视蛋白3 / 黑素瘤 / 增殖 / 长波紫外线 / 转录组测序技术 / Hippo信号通路