吡非尼酮对人肝星状细胞LX2增殖、活化以及糖酵解途径的影响

摘要

目的 探讨吡非尼酮(PFD)对人肝星状细胞LX2增殖、活化以及糖酵解途径的影响，分析其抗肝纤维化的作用途径。方法 用10μg/L转化生长因子-β1(TGF-β1)激活LX2细胞，将LX2细胞分为正常组[0.1%二甲基亚砜(DMSO)]、对照组(10μg/L TGF-β1+0.1%DMSO)及实验组(10μg/L TGF-β1+2、4、6及8 mmol/L PFD);用CCK-8法和平板克隆实验评价LX2细胞增殖能力，试剂盒检测细胞培养上清中的葡萄糖及乳酸水平，蛋白免疫印迹法(Western blot)检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(COL1A1)、葡萄糖转运蛋白1(Glut1)、己糖激酶2(HK2)、血小板型磷酸果糖激酶(PFKP)、M2型-丙酮酸激酶(PKM2)、乳酸脱氢酶A(LDHA)以及单羧酸转运蛋白1(MCT1)蛋白表达，实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测α-SMA、COL1A1、Glut1、HK2、PKM2、LDHA mRNA表达。结果 与正常组比较，对照组LX2细胞的增殖能力增强，α-SMA、COL1A1蛋白及mRNA表达增加(P<0.05),葡萄糖消耗及胞外乳酸积累增多，Glut1、HK2、PFKP、PKM2、LDHA、MCT1蛋白及Glut1、HK2、PKM2、LDHA mRNA水平升高；与对照组比较，实验组LX2细胞增殖受到抑制，α-SMA、COL1A1蛋白表达降低，细胞葡萄糖消耗及胞外乳酸积累减少，LX2细胞Glut1、HK2、PFKP、PKM2、LDHA、MCT1的蛋白及Glut1、HK2、PKM2、LDHA mRNA水平下降(P<0.05)。结论 PFD能抑制LX2细胞的增殖及活化，减少细胞外基质分泌，其抗纤维化能力可能与糖酵解水平下调、细胞能量代谢受扰有关。

关键词

吡非尼酮 / 肝星状细胞 / 糖酵解 / 肝纤维化 / 转化生长因子β1 / 葡萄糖