氧化低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞增殖及 circRNA-CER表达的影响

摘要

目的 探讨氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激人脐静脉内皮细胞(HUVEC)后环状RNA circRNA-CER(circRNA-100876)的表达及其对HUVEC增殖的影响。方法 分别以不同浓度ox-LDL(40、60、80、100及200 mg/L)刺激HUVEC 24 h,以及以100 mg/L ox-LDL刺激HUVEC 6、12、24及48 h,利用实时荧光定量PCR验证circRNA-CER在细胞中的表达水平；构建circRNA-CER特异性过表达质粒并进行细胞转染，采用CCK8实验研究circRNA-CER在血管内皮细胞增殖中的作用；荧光定量PCR检测circRNA-CER对miR-136表达的影响；Western blot检测过表达circRNA-CER后血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白表达水平，荧光素酶报告基因验证circRNA-CER与miR-136、miR-136与VEGF-3′UTR的相互作用。结果 随ox-LDL处理浓度增加，circRNA-CER在HUVEC中的表达量呈下调趋势，并在100 mg/L时差异有统计学意义(P<0.05);在用该浓度ox-LDL以时间梯度刺激HUVEC后，circRNA-CER表达随刺激时间的延长而下调，在24 h处差异有统计学意义(P<0.05);上调circRNA-CER表达可抑制ox-LDL(100 mg/L、24 h)对HUVEC增殖的抑制作用，上调miR-136的RNA及VEGF的蛋白表达水平，同时干预miR-136表达可阻止circRNA-CER对VEGF表达的调控；荧光素酶报告基因实验证实circRNA-CER与miR-136、miR-136可与VEGF 3′-UTR直接结合。结论 circRNA-CER可阻止ox-LDL对HUVEC增殖的抑制效应，机制为circRNA-CER通过“海绵样”作用调控miR-136后，影响其对下游靶基因VEGF的转录后调控。

关键词

环状RNA / 微小RNA / 动脉粥样硬化 / 人脐静脉内皮细胞 / 氧化低密度脂蛋白