氧化苦参碱对高糖诱导乳鼠原代心肌成纤维细胞转分化的作用及机制

摘要

目的 探讨氧化苦参碱(OMT)对高糖(HG)诱导乳鼠原代心肌成纤维细胞(CFBs)增殖和转分化的作用及机制。方法 Sprague-Dawley(SD)乳鼠20只，取乳鼠心脏的心尖部分分离与培养原代CFBs,取对数生长期CFBs细胞分为空白(Control)组、40 mmol/L甘露醇(Mannitol)组、不同浓度(30、35、40、45及50 mmol/L)HG组及不同浓度(25、50、100、200、400 mg/L)OMT组，采用噻唑蓝比色法(MTT)法检测细胞的增殖情况并确定后续实验OMT的保护浓度；按前述OMT的保护浓度结果，取对数生长期CFBs细胞分为空白(Control)组、40 mmol/L甘露醇(Mannitol)组、40 mmol/L HG(HG)组、40 mmol/L HG+50 mg/L OMT(OMT低剂量)组、40 mmol/L HG+100 mg/L OMT(OMT中剂量)组及40 mmol/LHG+200 mg/L OMT(OMT高剂量)组，采用天狼星红和苏木素-伊红(HE)染色法观察各组细胞的胶原纤维表达及形态变化，采用羟脯氨酸(Hyp)试剂盒检测法和免疫荧光染色法检测各组细胞Hyp及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达，采用流式细胞术检测各组细胞的周期分布比例，采用Western blot检测CFBs中α-SMA、结缔组织生长因子(CTGF)、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)、血管内皮生长因子A(VEGFA)及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白的表达。结果 与HG组相比，50、100及200 mg/L OMT组CFBs细胞活力下降(P<0.05);与HG组相比，50、100及200 mg/L OMT组CFBs细胞形态发生变化，细胞数量变少；与HG组相比，50、100及200 mg/L OMT组CFBs内Hyp含量减少，细胞在S期分布比例降低(P<0.05);与Control组相比，HG组CFBs细胞数量增多，α-SMA表达增多；与HG组相比，50、100及200 mg/L OMT组CFBs细胞数量减少，α-SMA表达减少；与HG组相比，50、100及200 mg/L OMT组HIF-1α、VEGFA、α-SMA、CTGF、CollagenⅠ、CollagenⅢ及FN表达下调(P<0.05)。结论 OMT可抑制乳鼠CFBs增殖并诱导细胞转分化，其机制可能与调节HIF-1α信号相关。

关键词

细胞增殖 / 糖尿病心肌病 / 缺氧诱导因子-1α / 乳鼠 / 氧化苦参碱 / 高糖 / 心肌成纤维细胞 / 转分化