热纤梭菌Cthe＿2401蛋白功能预测及在大肠杆菌中的克隆表达与纯化

摘要

目的 利用生信手段预测Cthe＿2401蛋白的特性与功能，并在大肠杆菌中进行体外克隆、表达与纯化。方法 利用国家生物技术信息中心数据库(NCBI)、蛋白保守结构域数据库(CDD)分析Cthe＿2401蛋白的序列和进化特征，采用SWISS-MODEL在线软件进行同源建模并预测该蛋白的结构与功能；利用聚合酶链式反应(PCR)扩增Cthe＿2401基因，并与pET28a载体链接构建pET28a-Cthe＿2401表达质粒，转化大肠杆菌后利用异丙基硫代半乳糖(IPTG)诱导Cthe＿2401蛋白表达；利用50%硫酸铵沉淀、Ni-NTA柱以及SephadexG75葡聚糖凝胶柱纯化Cthe＿2401蛋白。结果 生物信息学预测表明，Cthe＿2401蛋白属于Veg蛋白家族，可能与生物膜的发生和孢子形成有关；Cthe＿2401蛋白成功在大肠杆菌克隆与表达，体外纯化获得约10 ku大小的蛋白条带，与预期结果一致。结论 成功预测Cthe＿2401蛋白的功能，成功获得Cthe＿2401蛋白在大肠杆菌中的克隆、表达与纯化。

关键词

热纤梭菌 / Cthe＿2401 / Veg蛋白 / 生物信息学 / 蛋白表达与纯化 / 大肠杆菌

基金资助

国家自然科学基金(31760318,32160015); 留学人才创新创业项目(202208); 贵州省科技计划项目([2019]1441、[2020]1Z067); 大学生创新训练计划(202210660057)